miércoles, 6 de abril de 2016

Extracción de carbohidratos por método cualitativo con diferentes reactivos

Resumen de la practica


Sabiendo que los carbohidratos también llamados “hidratos de carbono” son constituyentes de los tres principales grupos químicos que forman la materia orgánica junto con las grasas y proteínas, se llevó a cabo la identificación de carbohidratos lo cual hace referencia a los cambios que se dieron en cada uno de las muestras de fructosa, sacarosa y almidón, carbohidratos con los que se trabajó con ayuda de la adición de otras sustancias que reaccionaron, y así pudimos observar cómo fueron esos cambios e identificar los tipos de carbohidratos a los que pertenecían cada uno de los elementos. Palabras Claves: Fructosa, almidón, sacarosa, reacción, mezcla, carbohidratos. Por medio de este informe daremos a conocer los cambios que se dieron en las sustancias al ser mezcladas en agua con (almidón), fruta dulce (fructosa), y el azúcar (sacarosa), haciendo referencia a estos como fuentes de carbohidratos; y luego al aplicarles otros elementos reactivos como el lugol y el fehling a y b que permitieron identificar y comprobar los principales tipos de carbohidratos al que pertenecían cada una de las mezclas, si fueron monosacáridos, disacáridos o polisacáridos, y así verificar si fueron positivos o negativos para cada uno; teniendo en cuenta los colores que se adquirieron en cada una de las muestras y cuando fueron expuestas al calor con el baño maría. Existen muchos tipos de carbohidratos y se encuentran principalmente en los alimentos tipo almidón, como el pan, fideos y arroz, así como en algunas bebidas endulzadas con azúcares. La principal función es proporcionar energía, aunque también desempeñan una función importante para la estructura y el funcionamiento de las células, tejidos y órganos.



Abstract 


Knowing that carbohydrates also called "carbohydrates" are constituents of the three major chemical groups that form the organic matter along with fats and proteins, carried out the identification of carbohydrates which refers to changes that occurred in each of the samples of fructose, sucrose and starch, carbohydrates with which we worked with the help of the addition of other substances that reacted, so we could see how were these changes and identify the types of carbohydrates that belonged each The elements. Keywords: Fructose, starch, sucrose reaction mixture, carbohydrates. Through this report we will present the changes that occurred in the substances to be mixed with water (starch), sweet fruit (fructose), and sugar (sucrose), referring to these as sources of carbohydrates; and then to apply other reactive elements such as iodine and fehling b which helped identify and check the main types of carbohydrates they belonged to each of the mixtures if they were monosaccharides, disaccharides or polysaccharides, to verify whether they were positive or negative for each; taking into account the colors were acquired in each of the samples and when exposed to heat the bath. There are many types of carbohydrates and are found mainly in starchy foods such as bread, noodles and rice, as well as some sugar-sweetened beverages. The main function is to provide energy, but also play an important for structure and function of cells, tissues and organs function.

Materiales



Metodología


Se prepararon cinco tipos de soluciones, las cuales son: Almidón al 1% m/v, celulosa al 5% m/v, fructosa al 5% m/v , galactosa al 5% m/v y sacarosa al 5% m/v.

Luego para hallar la reacción de Fehling se colocó en los tubos de ensayo, cierta cantidad de las soluciones ya mencionadas, y se añadieron 1ml de Fehling A y 1ml de Fehling B, seguido de esto calentar los tubos con "baño Maria", para saber si la reacción es positiva o negativa.
Para identificar los polisacáridos del almidon, la papa y zanahoria adicionamos gotas de lugol a estas sustancias y para concluir que la reacción es positiva esta, se tornara color azul-violeta.
Para realizar la reacción de Molish con el almidon, sacarosa, fructosa y bebidas hidratante y cero, se coloca de cada una de ellas 2ml en su respectivo tubo de ensayo, se le adicionan 3 gotas del reactivo de molish y luego de esto de manera lenta y por las paredes del tubo de ensayo, agregar 2ml de ácido sulfúrico.
Por ultimo para la reacción de bial colocar 2ml de cada muestra y adicionarles 4ml del reactivo de Bial, y llevar esto a "baño Maria" por unos 10 o 15min hasta la ebullición. 
Finalmente en la reacción de Seliwanoff se le agregan 5ml de seliwanoff y 3ml de cada muestra, seguido de esto, llevar todo a "baño Maria" durante 4 a 5 min.



Análisis, datos y resultados


Reconocimiento de azucares simples

FEHLING A (CELESTE) Y FEHLING B (INCOLORO)





-Discutiendo los resultados positivos que se dio en la galactosa, fructosa, hidratante y energizante. 
Se determina que en algunos compuestos no reductores como la fructosa que contiene un grupo cetona, puede enolizarse a la forma aldehído dando lugar a un falso positivo; la galactosa dio prueba positiva al ser un carbohidrato monosacáridos de un grupo  aldehído; el hidratante también dio positiva ya que en sus ingredientes posee fructosa y sacarosa, y las bebidas energizantes contienen un alto nivel de carbohidratos glucosa, fructosa y galactosa por esta razón su resultado también fue el mismo .
El energizante y el hidratante estas dos muestras son las que cambian a coloración naranja ladrillo, lo que indica que estas tienen mayor presencia de carbohidratos o azucares reductores que las otras muestras.

-Discutiendo los resultados negativos que se dio en el almidón, la celulosa, sacarosa, light, cero y zumo de limón.
Se puede determinar que estos resultados están basados en cantidad tan mínima de azucares que se encuentran en ellos; como en el limón que su dosis de fructosa es muy pequeña; la celulosa y el almidón no son azucares y por otro lado son polisacáridos, por tanto no son positivos debido a que este reactivo requiere de agentes reductores los cuales están presentes en los monosacáridos y algunos disacáridos; la bebida zero tiene casi nulo el porcentaje de azúcar por ración, así mismo la bebida light son aquellas que son reducidas en azúcar o algún nutriente por lo tanto no reacciona con este reactivo  y la sacarosa se da porque es un azúcar constituida por una molécula de glucosa y de fructosa, tiene un  enlace entre el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono de la fructosa, y no queda grupos reductores disponibles. Al no ser reductor, la prueba de Fehling es negativa.

Reconocimiento de azucares complejos


Reacción del lugol



Como resultado nos genero prueba positiva ya que todos en su composición contienen un mayor porcentaje de este carbohidrato.
En el primer tubo que contiene almidón al agregar dos gotas de yodo (lugol) nos dio una coloración azul negruzco esto se debe a que en esta reacción el yodo entra a la estructura helicoidal del almidón, es decir, que los átomos de yodo se introduce entre las espirales provocando la absorción o fijación de yodo en las moléculas del almidón (amilosa).
Se identifico que la papa contiene más polisacáridos que la zanahoria debido a su coloración.


Reaccion de Molish 




Discutiendo los resultados positivos de todas las muestras se determina que sí reaccionan con Molish, por lo tanto cumplen las características del funcionamiento de este reactivo.
-La fructosa presento la formación de un anillo de color rojo violeta en interface inmediatamente, lo que indica que corresponde a un monosacárido; la sacarosa presento en interface la formación de un anillo de color rojo violeta después de un tiempo, lo que indica que corresponde a un carbohidrato disacárido; el hidratante dio positiva ya que en sus ingredientes posee fructosa y sacarosa, y estos dos azucares son detectados por el reactivo; el almidón está compuesto por dos polisacáridos y la bebida zero contiene gran cantidad de carbohidratos que poseen más 5 carbonos.
Todas estas soluciones tienen en común que están compuestas por carbohidratos que contienen más de 5 carbonos por lo cual se pueden detectar al reaccionar con el molish.


Reactivo Bial 




Discutiendo los resultados negativos se establece que ninguna de estas soluciones cumple con las características que requiere el reactivo Bial; es decir ninguno de ellos es una pentosa (formado por 5 carbonos) que pertenece al grupo de carbohidratos monosacáridos.
 -El almidón pertenece a los carbohidratos polisacáridos que contienen más de 10 monómeros; la sacarosa pertenece a los carbohidratos disacáridos; la bebida hidratante en sus ingredientes posee fructosa y sacarosa, ninguna de ellas es una pentosa; la bebida zero contiene carbohidratos con más de 5 carbonos y la fructosa si pertenece a los monosacáridos, pero al grupo de las hexosas.


Reactivo de seliwanoff




Discutiendo los resultados positivos de la sacarosa, el hidratante y la fructosa, se determina que cumplen con las características requeridas para la reacción con Seliwanoff.
La sacarosa no es una cetosa pero está formada por una aldosa y una cetosa que es la fructosa razón por la cual el resultado es positivo; la bebida hidratante en sus ingredientes posee fructosa y sacarosa, debido a que estas dos soluciones dan positiva la prueba, la bebida hidratante por consiguiente también dará este resultado positivo y la fructosa arrojo un resultado positivo debido a que se clasifica dentro del grupo de las cetosas, esto se da porque la cetosa deshidratada reacciona con el resorcinol para generar un color rojizo medio anaranjado o levemente rosa, esto resultara dependiendo de la cantidad de solución que se utilice.

-Discutiendo los resultados negativos del almidón y la bebida zero, se establece que no son monosacáridos, por lo tanto no pertenecen al grupo de las cetosas.
El almidón pertenece a los carbohidratos polisacáridos y la bebida zero tiene casi nulo el porcentaje de azúcar por ración, por lo tanto es difícil que se determine como una cetosa de los monosacáridos.




Conclusiones


Se logró identificar azucares reductores y no reductores mediante el método de Fehling A y B, en donde salieron reductores la sacarosa y glucosa, debido a que tienen un grupo aldehido libre en su forma acíclica, mientras que la fructosa es no reductor porque no posee un carbono anomérico libre.
Al momento de la hidrólisis del almidón que está formado por amilosa y amilopectina, se observó que el lugol el cual contiene yodo, este queda adherido en las hélices de la amilosa dando asi una reacción positiva.
En la reacción de Bial observamos que ninguna mezcla dio color verde, puesto que las sustancias no tenían 5 carbonos, sino que tenían  6, es decir la reacción es negativa.
A pesar de la que fructosa y la glucosa son de composiciones similares como el color en algunas reacciones. 
Este informe permite observar y analizar que al reaccionar diferentes tipos de carbohidratos de cualquier sustancias, las cuales son mezcladas con reactivos químicos ayudan a identificar los diferentes tipos de glúcidos.


Bibliografia


Garcia MJ, Vicente JC. (1998). Estudio general del metabolismo de los hidratos de carbono. Madrid-España: Paraninfo.
Muñoz Eduardo. (2006). propiedades quimicas de los azucares. Barcelona-España: Sintesis.
Harris RA . (2004 ). Metabolismo Glucídico . Madrid-España: Reverté.






viernes, 1 de abril de 2016

Extraccion de ADN de la saliva humana

Resumen de la practica 



La secreción salival del hombre varía entre 1 y 1,5 litros diarios. Tiene una función lubricante y facilitadora de la masticación y la deglución; asimismo posee una función enzimática desdoblando los glúcidos (amilasa). Durante la noche casi deja de segregarse. La saliva en sí, no es un fluido que contenga componente celular y por ello carece por sí misma de ADN; pero se encuentra en un medio lleno de células epiteliales (epitelio bucal). Estas células se desprenden continuamente y llegan a formar parte de la saliva; El ADN se encuentra en el interior del núcleo de todas las células, disperso y muy replegado, unido a proteínas para formar la cromatina. Por lo tanto, podremos extraerlo a partir de prácticamente cualquier material de origen biológico, en primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. Después debe romperse igual la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que proteger el ADN de enzimas que puedan disminuirlo y para aislarlo hay que hacer que se precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.



Abstract


Man salivary secretion varies between 1 and 1.5 liters per day. It has a lubricant and facilitative role of chewing and swallowing; It also has an enzymatic function unfolding carbohydrates (amylase). Almost overnight stop segregating. Saliva itself is not a fluid containing cellular component and therefore lacks DNA itself; but it is in a place full of epithelial cells (oral epithelium) average. These cells are continually shed and become part of saliva; DNA is found in the nucleus of all cells, dispersed and very refolding protein bound to form chromatin. Therefore, we can remove it from virtually any material of biological origin, first have to break the cell wall and the plasma membrane to enter the cell nucleus. It must be broken just after the nuclear membrane to release the DNA. Finally we must protect DNA from enzymes that can decrease and to isolate it to do you rush in alcohol. DNA is water soluble, but when it is unrolled and alcohol precipitates is the interface between alcohol and water. In addition to allowing us to see the DNA, alcohol separates DNA from other cellular components, which are left in the aqueous solution. The salt prevents binding of proteins to DNA.

Materiales





















Metodología



Se agregaron 25ml de agua en un vaso precipitado, luego de esto agregamos un poco de saliva (aproximadamente de 2 a 5ml), ya con esto mezclamos un poco y luego adicionamos 10g de sal y seguimos agitando nuestra mezcla, agregamos 5ml de detergente y continuamos mezclando, luego de esto, adicionamos nuestra encima, que en este caso es el jugo de piña; por ultimo adicionamos un poco más de agua destilado (aproximadamente unos 10ml) para poder observar mejor nuestro ácido desoxirribonucleico y para finalizar agregamos 25ml de alcohol para que el ADN llegue a la parte superior de nuestro vaso precipitado y así poder tomarlo y llevarlo hasta un microscopio para poder observarlo de manera más detallada.



Análisis, datos y resultados


  • ¿Por qué se usa detergente en este experimento?
El detergente utilizado en el experimento tiene como función, destruir las membranas celulares del tejido vivo que estamos utilizando; el detergente disuelve las grasas, siendo el componente principal de la membrana plasmática y nuclear de las células;   al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior. 


Fuente: http://learn.genetics.utah.edu/es/extraction/detergent.cshtml


  • ¿Que función cumplen las enzimas (jugo de piña) en la extracción del ADN? 
Esta enzima contribuye en el procedimiento de eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN, permitiéndonos observarlo mejor.

  • Realizar un glosario

·  Enlaces fosfodiéster: es un enlace covalente que se produce entre un grupo fosfato (H3PO4)  y un grupo hidroxilo (–OH). Este tipo de enlace lo podemos encontrar en fosfolípidos que forman la membrana celular, y en nucleótidos, que forman los ácidos nucleicos ARN y ADN.
·         Polinucleótidos: es una molécula orgánica del polímero abarcada de los monómeros del nucleótido covalente enlazados en una cadena. El ADN y el ARN son ejemplos de polinucleótidos con la función biológica específica.
·         Enzimas: son proteínas complejas que producen un cambio químico específico en todas las partes del cuerpo. Por ejemplo, pueden ayudar a descomponer los alimentos que consumimos para que el cuerpo los pueda usar. La coagulación de la sangre es otro ejemplo del trabajo de las enzimas.
·         Proteínas: son macromoléculas compuestas por carbono, hidrógeno, oxígeno y nitrógeno. La mayoría también contienen azufre y fósforo. Las mismas están formadas por la unión de varios aminoácidos, unidos mediante enlaces peptídicos. El orden y disposición de los aminoácidos en una proteína depende del código genético, ADN, de la persona.
Aminoácidos: son la base de todo proceso vital ya que son absolutamente necesarios en todos los procesos metabólicos. Sus funciones más importantes son el transporte óptimo de nutrientes y la optimización del almacenamiento de todos los nutrientes.

En este laboratorio pudimos analizar que al agregar sal en esta disolución actúa disminuyendo la solubilidad de las proteínas, haciendo que precipite y se separe más fácilmente del ADN. 

Con el detergente utilizado en el experimento pudimos considerar que su función es destruir las membranas celulares del tejido vivo que estamos utilizando, porque al romperse las membranas celulares se permite la salida del ADN al exterior. 
El ADN es una molécula muy larga y tiende agruparse. De ahí la facilidad para retirarla. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra en alcohol se precipita en la interface entre el alcohol y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

Con las enzimas pudimos romper y separar del ADN, que es el material que encontramos. El jugo de piña provoca la ruptura de múltiples enlaces en las proteínas ya que contiene papaína.


Bibliografia 

Feduchi-Blasco-Romero-Yañez. (2003). Bioquimica "Conceptos esenciales". Inglaterra : Panamericana. 
José Teijon Rivera- Amando Garrido . (2009). Bioquimica Metabolica. Austria : Tebar.


Elaborado y presentado por :